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AnnExin v pi双染

理论上无染色的细胞室健康细胞,annexin单染的是早期凋亡,双染是中期,PI单染是坏死细胞.其实这个检测的结果是很不准确的,已经逐渐被弃用,而换用其他更加特异敏感的方法,比如活化的caspase等等.这个方法人为的

FITC-Annexin V/PI双染色法检测人肺癌细胞凋亡的形态.方法对不同剂量含药血清处理的体外培养人肺癌PGLH7细胞株进行Annexin V/PI双染,激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡的形态特征.

Annexin V-FITC/PI双染色用荧光显微镜观察方法1. 悬浮细胞染色后,滴一滴细胞悬液于载玻片上,用盖玻片盖上细胞,荧光显微镜下观察.2. 贴壁细胞可以象悬浮细胞那样染色后,滴一滴细胞悬液于载玻片上,用盖玻片盖上细胞,荧光显微镜

Annexin V-FITC流式细胞分析法特异性高,TUNEL法灵敏度高,两种方法相结合检测细胞凋亡更准确.一般如果使用BIODAI检验细胞凋亡的盒子,双染法荧光信号更强,没有细胞毒性,不容易淬灭,还稳定.

annexin FITC/PI 双染应该有试剂盒的吧,在染色的时候应当是用buffer来稀释的而不是PBS,所以染色前应当将PBS离心去除再加入以buffer稀释的染色试剂,再上机检测.您在携带细胞去检测的路上可以用含2%小牛血清的PBS能够较好的保护细胞.

你做的是annexin V 和PI双染吧.FITC代表的是annexin V 染色, 代表早期凋亡,PI 单染,代表死亡的细胞,双染阳性的是正在凋亡的细胞.所以,Q2+ Q4就是所有凋亡的细胞

除了上述的操作步骤,还有一个必须注意的,就是对照.阴性对照,阳性对照,还有调节通道的,只加PI,只加AV,这些都要设计好,要不测出来的值不可信.细胞接种后,每日计数细胞数,连续观察7-10日,在对数坐标纸上绘制细胞生长曲

Q1:(AnnexinV-FITC)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞.也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中.Q2: (AnnexinV+FITC)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞.Q3:(AnnexinV-FITC)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细

做这个实验,有几个要求:第一,贴壁培养的细胞要处理的非常轻柔,不然会导致大量假阳性(Annexin V 阳性).这个方法最好是由于悬浮培养的,比如淋巴细胞 第二,从图上看,你的电压设置的过低,第一个图阴性无染色的细胞都被压倒一起,而不是位于左下象限的中间.另外,你的阳性对照的细胞,用的是已知确定凋亡死亡的细胞吗?PI的染色看起来很弱 第三,Annexin V单染没有强阳性,而且这个细胞群都有右移,这个提示很可能是你处理细胞过头导致的假阳性.第四,你没有贴FSC-SSC的图.真有凋亡发生,那个图也会有变化的.第五,你的单染对照因为设置的电压过低,没有做对双色补偿,所以你这个实验数据时无效的.

在二维散点图上,PI 和 annexin V 分别是X和Y轴.一般认为PI单染的细胞是已经死亡的细胞,annexin V 单染的细胞是凋亡早期的细胞,而双染是凋亡中期的.需要在散点图上先画出4个象限,位置根据无染色的阴性细胞先定出左下象限.

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